| 2. Vectors per a procariotes: Plasmidis i bacteriòfags. |
Característiques bàsiques dels vectors plasmidis i bacteriòfags. Selecció. Millora dels vectors bàsics. Plasmidis pBR322 i pUC. Vectors derivats del fag lambda d’inserció i de substitució. Vectors avançats. Aplicacions: Phage Display. |
| 4. Introducció del DNA a l’hoste i selecció de recombinants. |
Transformació per mètodes químics i físics, mètode del clorur de calci, electroporació. Virus. Identificació dels organismes transformats. |
| 6. Clonatge en llevats. |
Clonatge en S. cerevisiae. Vectors: vectors d’integració cromosòmica (YIp) i vectors de replicació autònoma (YEp, YRp, YCp, YAC). Introducció de DNA en llevats. Expressió de proteïnes recombinants. Yeast cell surface display. Aplicacions: Yeast Two Hybrid, Yeast Three Hybrid. |
| 7. Enginyeria genètica en cèl•lules animals. |
Transfecció transitòria i estable. Estratègies de transfecció. Mètodes de selecció. Vectors: plasmidis no replicatius, plasmidis amb replicons vírics, vectors vírics (retrovirus, lentivirus, adenovirus). Cèl•lules empaquetadores. Expressió de proteïnes. Gene silencing per RNA d’interferència. Aplicació: teràpia gènica. |
| TEMARI PRÀCTIQUES |
1. Clonatge de cDNA humà a vector de expressió del llevat.
2. Clonatge de DNA del fag lambda a vector de clonatge de bacteri. |
Assignatures
